探针作用是什么?
简单的说,探针(probe)就是用来探测DNA序列的分子,通过分子杂交的原理来检测靶序列的存在(或缺失)以及位置; 由于核酸分子具有序列特异性,因此可以作为生命的密码,利用它进行遗传信息传递、基因表达调控以及遗传疾病的靶向治疗。同时,由于体外扩增体系中需要特定的引物才能扩增目的片段,所以引物也必须具有序列特异性;此外在基因测序中也需要探针来进行序列定位和判断突变类型。 基于上述原因,探针的应用十分广泛,可以用于:
1.基因诊断 在基因诊断方面,应用最为广泛的探针是荧光标记的寡核苷酸探针。由于寡核苷酸具有序列特异性,因而可以用其来识别基因组DNA或RNA中的特定序列,通过分子杂交原理检测目标序列的存在,从而对疾病进行诊断。例如,应用荧光素标记的c-myc原癌基因探针可检测食道癌组织中该基因的扩增情况和点突变情况,为食道癌的诊断提供重要依据。另外,可用免疫学方法制备的抗基因探针通过分子杂交技术也可以实现对基因的分析。
2.基因分型 人类基因组存在着结构变异和单核苷酸多态性等基因组特征,这些特征可以为个体提供独特的遗传印记。应用不同探针进行分子杂交,就可以获得被检样本的基因组特征,实现基因型的鉴定。
3.基因表达水平检测 基因表达调控是一个复杂的过程,涉及许多因子和酶的作用。研究某些基因的表达情况时,常常需先测定该基因mRNA的水平。如果已知基因的全部编码序列,可以利用计算机辅助设计合成含有所测基因片段的探针作为mRNA的特异捕获剂,再以逆转录酶催化的反应获取相应的cDNA,然后进行杂交以检出所测基因是否表达及其表达量的情况。